Absolute Eosinophils Count कैसे करते है - Bulk Dilution

Absolute Eosinophils Count कैसे करते है  - Bulk Dilution

Total  Eosinophils Count  को  ही  Absolute Eosinophils Count  (AEC)  भी कहते हैं |

CBC Test  क्याहै | CBC क्यों करते है  

Absolute Eosinophils Count  - (Bulk Dilution)

Total  Eosinophils Count  की  इस  technic  से सभी  clinical lab  में  Absolute Eosinophils Count  (AEC)   Test  किया जाता है | इस  technic  से बहुत से मरीजों  का  test  के लिए sample  लेकर बाद में किया जा सकता है |

TLC (total leukocytes count) Test कैसे करते है

Principle:

Blood  को  जब  absolute eosinophil diluting fluid  में  dilute करते  हैं  तो उसी समय यह RBC  एवं  WBC  को lyses करता  है  और eosinophil granules को  ज्यादा  तेज  और स्पष्ट रूप  से  stain  करता  है |  

Requirements:

1.      Micro pipettes & Tips

2.    Absolute Eosinophils  Diluting Fluid – Dunger’s Fluid

 Eosin Yellow     -     0.5 gm.

Acitone(95%)   -     0.5 ml.

Formalin(40%)-     0.5 ml.

Distilled  Water-      99  ml.

( 6 ml  fluid  को  100 ml. Distilled  Water में  dilute  करके  mix  करके  filter करके रखें )

3.     Neubauer Counting Chamber & Cover Slip -  Neubauer Chamber में two platform होते है | दोनों platform में marking होता है व दोनों में counting कर सकते है | Cover slip  रखने  पर बीच में 0.7 mm गहरी जगह रहती है | Marking area 3 x 3 mm ( 9 Square mm ) व 9^th  large Quadrilateral area होते है चारों कोने वाले Quadrilateral area  में  single line रहता है चारों कोने वाले Quadrilateral area में 16^th  small Quadrilateral area  होते है | यह  WBC Counting Area  है  तथा बीच वाले Quadrilateral area में 400  small Quadrilateral area  होते है | चारों कोने वाले Quadrilateral and Square measure 1 Square mm होता है व प्रत्येक सबसे छोटे खाने (small area) 400 का Square measure 1/400 Square mm  होता है यह RBC Counting area  हैCounting के समय जो cells Quadrilateral area  की ऊपरी व left line को touch  करे उन्हें Square के अन्दर और  जो cells Quadrilateral area  की निचली व Right  line को touch  करे उन्हें Square के बाहर मानते हैं

4.        EDTA Blood

·        Capillary Blood कैसे लेते है

·        Test  के लिए Blood  Colection कैसे करते है – Syring द्वारा

5.    Microscope

6.     Tissue Paper

Test Procedure:

·        Clean & Dry Test Tube में micro pipette की सहायता से  950 μl ( 0.95 ml ) Absolute Eosinophils  Diluting Fluid  लें |

·        Micro pipette की सहायता से  50μl Or  (0.05 ml)  तक सावधानी से  EDTA blood  लें |

·        Micro pipette  Tips के बाहरी सतह पर लगा extra blood  को  tissue paper Or cotton से clean कर लें |

·        Micro pipette  में लिए  गये Blood  को Test tube  के  Absolute Eosinophils  Diluting Fluid  में डाल कर  Mix  कर  लें  और  5 मिनट wait  करे |

·        Clean & Dry Neubauer Counting Chamber & Cover Slip  ले |

·        Cover Slip को Neubauer Counting Chamber में इस प्रकार रखे कि Neubauer  Chamber में अंकित चतुर्भुज इससे ढक जाय |

·        अब Dropper Or  Micro pipette  की सहायता से Dilution  ले कर 45 degrees के Angle पर Chamber  &  Cover Slip के बीच रख कर Dilution को  Neubauer Chamber में  load करें ( याद रखे इस प्रक्रिया में air bubble न बने  व Counting area पूरा भर जाना चाहिए और Dilution chamber  से बाहर नहीं बहना चाहिए )|

·        5 मिनट Cells के set  होने तक स्थाई रखे |

·        अब  Microscope  में  set  करके  10x ( Low Objective) एवं  कम रोशनी में  फोकस करके  Absolute Eosinophil Count  करे |

Calculation:

No. of  Eosinophils /cumm =

No. of cells counted(N)X Dilution/

Area Counted X Depth of fluid  

चारों बड़े चतुर्भुजो का क्षेत्रफल = 1 Square mm  

Chamber का आयतन = लंबाई  X  चौड़ाई  X  गहराई

                                =   3     X    3      X   0.1  

depth  of chamber  = 0.9 mm

अब आयतन 0.1 Cubic mm हुआ |

Calculation – यदि हम  Chamber  की  4 चतुर्भुजों (Chamber  की  wbc  area) को count  करें  -

Chamber की 4 चतुर्भुजों का आयतन = 0.1 X 4 = 0.4 Cubic mm

No. of cells count = N

Dilution  = 1:20  का

0.4 Cubic mm में है   = N Cells

1 Cubic mm में है   =

No. of cells counted(N)X Dilution(20)

Area Counted(4) X Depth of factor(0.1)  

= N  X  20/0.4

= N  X  10/4  

= N X  50/cu.mm.

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·        HBsAg  test   कैसे  करते है  

Calculation – यदि हम  Chamber  की  9  चतुर्भुजों (Chamber  की  all  counting  area) को count करें  -

Chamber की  9  counting  area का आयतन = 0.1 X 9 = 0.9 Cubic mm

No. of cells count = N

Dilution  = 1:20  का

0.9 Cubic mm में है   = N Cells

1 Cubic mm में है   =

No. of cells counted(N)X Dilution(20)

Area Counted(9) X Depth of factor(0.1)  

= N  X  20/0.9

=  N  X  22.2  

= N X  22.2/cu.mm.

Normal Range = 40 – 450 Cells / cu.mm.

Manual  Formula  of   Absolute Count :

इस   Manual  Formula  of   Absolute Count  से  भी  हम  Neutophils, Lymphocytes, Eosinophils, Monocytes, Basophils  का  Absolute Count   प्राप्त कर सकते है |  लेकिन  Absolute Count  Reporting  के लिए हमेशा  Absolute Count  का  Test  करें |

Absolute Eosinophil Count  के  लिए –

TWBC*Eosinophil/100

Exaple -    

TWBC=  5000, Eosinophils = 6%

5000*6/100

= 300

 Absolute Eosinophil Count  300/cumm.

Normal Range = 40 – 450 Cells / cu.mm.

Absolute Neutophil Count  के  लिए –

TWBC*Neutophil/100

Exaple -    

TWBC=  5000, Neutophils = 50%

5000*50/100

= 2500

Absolute Neutophil Count  2500/cumm   

          

Normal Range = 2000 – 7000 Cells / cu.mm.

Absolute Lymphoctes Count  के  लिए –

TWBC*Lymphotes/100

Exaple -    

TWBC=  5000, Lymphocytes = 42%

5000*42/100

= 2100

Absolute Neutophil Count  2100/cumm   

          

Normal Range = 1000 – 3000 Cells / cu.mm.

Absolute Basophils Count  के  लिए –

TWBC*Basophils/100

Exaple -    

TWBC=  5000, Basophils = 0%

5000*0/100

= 0

Absolute Basoophils Count  0/cumm   

          

Normal Range = 20 – 100 Cells / cu.mm.

Absolute Monocytes Count  के  लिए –

TWBC*Monocytes/100

Exaple -    

TWBC=  5000, Monocytes = 2%

5000*2/100

= 100

Absolute Monocytes Count  100/cumm   

          

Normal Range = 200 – 1000 Cells / cu.mm. 

    

इस  प्रकार  से  आप  भी  Absolute Eosinophil Count  या  Total Eosinophil Count  test कर  सकते  है |

·        CBC Test  कैसे  करते  है

·        TLC  Test  कैसे  करते है

·        Platelet Count   कैसे  करते  है

·        Field’s Sataining  कैसे  करते  है

·        HBsAg  test   कैसे  करते है

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