Slide Staining कैसे करते हैं – Leishman’s stain And Giemsa stain

Slide Staining   क्या  है :

Pathology  lab  में  Specimen  का  microscopic  glass  slide  में  smear  बनाने   के   बाद  examine  करने  के  लिए  slide   को  रंजक  घोल  द्वारा  रंगना  होता  है | ताकि  specimen में  उपस्थित cells, bacteria bacillus  की  पहचान  हो  सके | रंजक  द्वारा  रंगने  पर  cells, cells nucleus, cytoplasm, granules, gram positive, gram negative bacilli  इत्यादि  अलग अलग  color  में  रंग  जाते है | जिससे  पहचान  करने  में  आसानी  होती  है |  

smear slide  को आवश्यकतानुसार  अलग अलग  रंजक घोल  में  रंग जाता है  इस  घोल  को  stain  कहते  है और  रंगने  की  प्रक्रिया  को  staining  कहलाता है |

Stain  कई  प्रकार  के  होते  है  |  हम  जो  Romanowsky Staining  करते  है |

Romanowsky Staining  neutral stain  है  oxidized methylene blue  और  Eosin yellow  का  मिश्रण  है | oxidized methylene blue  जो  कि  अम्लीय  केन्द्रक  को  नीले –बैगनी  रंग  और  acid dye Eosin  Red color का उत्पाद करने वाले  क्षारीय  कोशिका द्रव्य   से  आकर्षित  होता है |

Romanowsky Staining  में  शामिल है –

1.    Leishman’s Stain

1.     Field Stain

1.    May Grunwald  - Geimsa  Stain

1.    JSB  Stain

1.   Jenner’s  Stain

1.    Wright’s Stain

Leishman’s staining:

Leishman stain's - stain  होने  पर  blood cell morphology  की  तस्वीर  देने  में  से एक best  stain  है। यह उत्कृष्ट  stain quality. प्रदान करता है  आमतौर पर इसे लीकोकॉइट, मलेरिया परजीवी, और ट्रायपोनोसोमा को पहचानने और पहचानने के लिए उपयोग किया जाता है। यह "पॉलीकार्मेड" मेथिलिन नीले (यानी विभिन्न आकृतियों में डिमैथिलेटेड) और  ईओसिन के मेथनॉल मिश्रण पर आधारित है।

Leishman stain's Preparation:

1.  Leishman stain's Powder                          - 0.15 gm.

1.  Methanol(acetone free –methyl alcohol  - 100 ml.

दोनों  को  एक  कांच  के बोतल  में  डाल कर  अच्छे से  घोल ले  और  ३ दिनों  के  लिए  स्थाई  रख दे  तत्पश्चात  फिल्टर  करके  प्रयोग में लायें |

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Leishman stain's principle:

Leishman stain's - stain  होने  पर  blood cell morphology  की  तस्वीर  देने  में  से एक best  stain  है। Leishman stain's  में  मेथनॉल (acetone free)  में  methylene blue (नीले ) और  Eosin   होता है। इसे  तैयार किया  गया  माइक्रोस्कोपिक  smear  slide   पर डाला जाता है,  बफर के साथ पतला किया  जाता है। बाद में डी-आयनित पानी से धोया जाता है और सुखा दिया जाता है । एक माइक्रोस्कोप  में  Under oil immersion objective  के अंतर्गत, कोशिकाओं को निम्न प्रकार से दिखाई देता है:

RBC कोशिकाएं   -  पीले  लाल  रंग  के,  red ।  

Neutrophils -  dark  बैंगनी केन्द्रक (nucleus) , पीले गुलाबी cytoplasm ,  Reddish granules ।

Eosinophils - नीले केन्द्रक( nuclei ), पीले गुलाबी cytoplasm, लाल-नारंगी लाल बड़े granules।

Basophils - गहरे नीले रंग के nucleus, dark  बैंगनी-काला बड़े granules ।

Lymphocytes-dark बैंगनी nuclei, sky blue cytoplasm ।

 Platelets - violet -बैंगनी।

मैथिलीन नीली है एक मूल डाई अम्लीय घटक को रंग देती है जबकि ईओसिन एक अम्लीय डाई है जो मूल घटक को रंग देता है।

Requirement:

     1.   Leishman stain's

2.   Buffer water.

3.   Distilled water.

4.   Staining dish.

5.   Tissue paper Or Cotton.

6.   Dropper.

7.    Slide Stand.

Procedure:

Blood  smear  slide   को  staining  dish  पर  रखे | 

• 
  

• Blood  smear  पर  पर्याप्त  मात्रा  में   Leishman’s  stain  solution,  dropwise  डाले |

• दो मिनट  ( wait 2 minutes) तक  wait   करें |   अब  Leishman’s  stain  solution  के  बराबर  में  Buffer water dropwise  डाले |

• 
  

•  Leishman’s  stain, Buffer  solution  स्लाइड  से  बहना  नहीं  चाहिए |  इसे  अच्छी  तरह  मिलाए  जिससे  सतह  पर   एक चमकीली  झिल्ली  सी नजर  आए |   Leishman’s  stain, Buffer  solution  स्लाइड  पर  8 मिनट  तक  रहने  दें  |  अब  इसे  water (D/W) से  wash  करे  दें  |  Slide  के  पीछले  हिस्से  को  Tissue paper  or  cotton  से  साफ  करें  और  air dry करके  microscope  oil immersion lens  से  examine  करें |

Giemsa  Staining:

principle:

Giemsa  Stain , blood  smear   को   color   करने   का  permanent  stain  है | जिसमें  methanol  separate fixative  है  और  Giemsa  Stain  color  प्रदान  करता  है | Giemsa Stain  से  Blood smear  Staining  होने  पर  -

RBC ( Erythrocytes )  -  हल्के  लाल  रंग

WBC (White Blood Cells) में   Nuclei – बैगनी,  Cytoplasm – हल्के  बैगनी, Granules – Dark Pink.

Parasites   में   cytoplasm  –  नीले  रंग, Nuclear – लाल  या  बैगनी युक्त  लाल  |

Microfilaria    में   sheath – stain poorly, एवं  Nuclei – नीले  या  बैगनी नीले  रंग का दिखाई  देता  है |

Preparation  of  Giemsa Stain :

Using Commercially Available Reagent

1. Giemsa Stain Powder                   -  0.15 gm.

2.Glycerine                                        -  12.5 ml.

3.Methyl Alcohol                              -  12.5 ml.

Mix  करके  solution  को  कॉर्क  लगे  बोतल में  भरकर  रखे |

( Use  करने  से  पहले  1  part  Giemsa solution  और   9 part  Buffer water  मिला  लें  ( Dilution 1:10  ) |

 Giemsa  Stain  ( Thin Smear):

Requirement:

   1.  Giemsa  stain  Solution.

   2. Methanol (absolute).

   3. Water

   4. Staining dishes  

   5. Tissue Paper  Or Cotton

Procedure:

1. एक  clean  glass  slide  में  thin  blood  smear  बनाये  और  air  dry करे |   

2.अब  Methanol  Staining  dishes  में  30 seconds  डूबा कर  thin  blood

smear slide  को  Fix  करें | 

3.Microscopic slide को  tissue paper  से  और   हवा  में  सुखा  लें | 

4.fixed smear  को  Giemsa Stain  (Blue Stain) Staining  dishes  में  5  to  15 minutes  तक  डूबाकर (Dip) रखें |( Staining  time  may  be  adjusted)

5.Wash in running tap water. 

     6. Slide  के  पीछले  हिस्से  को  Tissue paper  or  cotton  से  साफ  करें  और  air dry करके  microscope  oil immersion lens  से  examine  करें |

Giemsa  Stain  ( Thick Smear):

Requirement:

1.     Methanol (absolute)  Or  Spray Fixative - NO

2.   Giemsa  stain  Solution.

3.   Water

4.   Staining dishes

5.   Tissue Paper  Or Cotton

 

Procedure:

·        एक  clean  glass  slide  में  thick  blood  smear  बनाये  और  air  dry करे |

·        Blood  smear  को  Giemsa  Stain  (Blue Stain) Staining  dishes  में  5  to  15 minutes  तक  डूबाकर (Dip) रखें |( Staining  time  may  be  adjusted)

·        Wash immediately in running tap water.

• ·        Slide  के  पीछले  हिस्से  को  Tissue paper  or  cotton  से  साफ  करें  और  air dry करके  microscope  oil immersion lens  से  examine  करें |

( Thick Blood Smear Slide  को  Haemolysed  किया  जाता  है  इस लिए  इसे Methanol से  fix  नहीं  करते  सीधे  Giemsa Stain  में  ही  डूबना  है | )

इस  प्रकार  से  आप  भी  Blood Smear slide   बना  कर  आवश्यकतानुसार  Staining

करके  microscope    से  देख  सकते  है |

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