DIFFERENTIAL LEUKOCYTE COUNT (DLC) कैसे करते हैं

Leukocyte:

सफेद रक्त कोशिका या व्हाईट ब्लड सेल्स( WBC) बेहद जरूरी होती हैं  क्योंकि ये  cells  हमारे शरीर को रोगों से लड़ने की शक्ति प्रदान करती हैं। ये cells लगातार नष्ट होते और बनते रहते हैं। किसी स्वस्थ इंसान के रक्त में ये  4000 से 11,000 cells/cu.mm तक होती हैं। एड्स, कैंसर, टी बी, हेपेटाइटिस कमजोरी आदि जैसे रोगों  में सफेद  रक्त कोशिकाओं की संख्या कम-ज्यादा हो सकती है, हालांकि बेहतर आहार और दवाओं की मदद से सफेद रक्त कोशिकाओं की संख्या को बढ़ाया जा सकता है। WBC की कमी को  Leucopenia  और अधिकता को Leukocytopenia कहते हैं |

Leukocytes ( WBC ) को  दो  प्रकार  से  Count  करते  है

1.      Total Leukocytes Count ( TLC ).

       2.    Differential Leukocytes  Count ( DLC )

DIFFERENTIAL LEUKOCYTE COUNT (DLC)

Leukocyte को सफेद  रक्त  कणिका   (WBC) भी कहा जाता है और सामान्य  रूप से रक्त के सफेद कोशिका के रूप में जाना जाता है लेकिन ये सफेद रंग नहीं हैं, ये रंगहीन हैं। सफेद रक्त कोशिकाओं में संक्रमण (बैक्टीरिया, वायरल, प्रोटोजोअन, परजीवी आदि), एंटीजन और दुर्भावना के विरुद्ध लड़कर किसी भी बीमारी के खिलाफ हमारे शरीर की रक्षा करते  हैं।

 ये दो  प्रकार  के  हैं:

1.       Granulocytes (Neutrophil, Eosinophil and Basophile)

2.     Agranulocytes (Monocyte and Lymphocyte).

Leishman’s stain  या  अन्य  staining  करके blood smear  slide  को  microscope  में oil immersion objective (100X) में परीक्षण करके Neutrophils, Lymphocytes, Monocytes, Eosinophils, Basophiles  and Other Cells  की  पहचान  एवं  गिनती  की जाती हैं | जिसे  Differential Leukocytes  Count ( DLC ) कहते हैं |

Microscope  oil immersion objective (100X)  में  Leukocytes  को निम्नानुसार देखा जाता है:

Neutrophils:

Neutrophils  गोल आकार  और व्यास में  10 - 15μ के  होते हैं  |  Cells में cytoplasm और नाभिक(nucleus) होता है। nucleus चर  की संख्याओं को दिखाता है, 2 - 7 गोले (lobes) होते है , इसलिए polymorphonuclear leukocytes कहा जाता है। nucleus stain बैंगनी नीले और chromatin  मोटे रस्से जैसे होते  हैं |  Cytoplasm में दो प्रकार के granules होते हैं - Primary granules and Secondary granules. जब cells Leishman’s stain में  केवल Primary granules stain होते  हैं और ये बैगनी  रंग के granules होते हैं, जो amphophilic हैं। cytoplasm  गुलाबी  रंग लेता है |

Neutrophils को पहली पंक्ति की सुरक्षा कहा जाता है क्योंकि वे पहले आक्रमणकारी सूक्ष्म जीवों (बैक्टीरिया आदि) से लड़ने के लिए जाते हैं। Neutrophils अपने enzymatic शस्त्रागार के  शानदार हत्यारें  हैं। सक्रिय neutrophils बैक्टीरिया (phagocytosis) को घेरते हैं और phagocytic vesicles में अलग-अलग एंजाइमों को जारी करते हैं,  जिसमें   बैक्टीरिया को मार कर  इसे पचा  लेता  हैं |

Eosinophils :

Eosinophils गोलाकार और  व्यास में 10 - 15μ के  होते हैं | कोशिका में मोटी एवं  brick red colour  के  granules  होता है जो acidic stain (eosin) होता है इसलिए इसे Eosinophil  कहा जाता है। और cells के nucleus में 2 से 3 lobes होते हैं |  Nucleus बैंगनी नीले रंग और chromatin श्रृंखलाबद रस्से जैसे होते है |

Eosinophils  में  मेजर बेसिक प्रोटीन (MBP) होता है जो परजीवी के लार्वा को नुकसान पहुंचाता है। एक eosinophilic cation protein है जो संभवतः heparin anticoagulant को निष्क्रिय कर सकता है। उनके पास एक ऐसी संपत्ति है जो anaphylaxis (anti allergic action) को रोकती है।

Basophils :

Basophils  गोलाकार  और व्यास  10 से 15μ  के  होते हैं  | कोशिका में  bilateral  या 'एस' आकार के और  बैंगनी नीले रंग का नाभिक (nucleus) होते है  और chromatin मोटे और रस्से जैसे  होते हैं | cells की cytoplasm श्रृंखलाबद रस्से जैसे नीले बेओसोफिलिक granules के साथ होते है  औसतन सभी  granules  समान आकार के होते हैं, जो nucleus को अस्पष्ट (छिपा हुआ ) रहता है |

Lymphocytes:

Blood में दो प्रकार के lymphocytes  पाए जाते हैं

 Small Lymphocytes और large Lymphocytes हैं। Small Lymphocytes को आराम समय  का  और सक्रिय होने पर वे बड़े होते हैं।

Small Lymphocytes :

Small Lymphocytes अपेक्षाकृत छोटे और  व्यास  8 - 10μ  होते हैं  | कोशिका में  एक बड़ा नाभिक (nucleus)  होता है जो लगभग कुल कोशिका पर कब्जा कर लेता है और अल्प कोशिका द्रव्य (cytoplasm )होता  है |  सेल में cytoplasm  नीले रंग  और  nucleus गहरा नीला रंग होता है |

Large  Lymphocytes:

Large Lymphocytes अपेक्षाकृत बड़े, गोलाकार और व्यास 10 - 18μ  होते  हैं | इनमें एक राउंड आकार के गहरे नीले रंग के nucleus होते हैं, जिसमें श्रृंखलाबद रस्से जैसे chromatin होते हैं और किसी भी nucleus के साथ  प्रचुर मात्रा में स्पष्ट नीले  cytoplasm  होते  हैं |   यह  बहुत महत्वपूर्ण रक्षा तंत्र में शामिल हैं, जिन्हें प्रतिरक्षा कहते हैं B-lymphocytes, हिंसक प्रतिरक्षा के लिए जिम्मेदार हैं और T-lymphocytes, Cell  मध्यस्थता प्रतिरक्षा के लिए जिम्मेदार हैं |

Monocytes:

Monocytes  बड़े, गोल, 10 - 20μ व्यास,   कोशिका में एक बड़ी गुर्दे  के  आकार (kidney shaped) का हल्के बैंगनी नीले रंग का nucleus और नीली रंग की cytoplasm होते  है  कोई granules  नहीं  होती हैं |  कभी-कभी   बैंगनी ग्रैन्यूल और रक्तिकाएं  को  cytoplasm में  देखा जाता है | Monocytes द्वारा secreted monokines, T-cells, को उत्तेजित, सूजन में भाग लेने , pyrogen के रूप में कार्य और तीव्र चरण प्रोटीन के गठन को प्रोत्साहित करते है | वे सूक्ष्मजीव, मृत ऊतकों आदि को  macrophases  और  phagocytosis  में  परिवर्तित  कर  देते  हैं |

Normal  Values:

Neutrophils    : 40 – 75 % 

Lymphocytes : 20 – 45 %

Monocytes     : 2 – 10 %

Eosinophils    : 1 – 6 %

Basophils       : 0 – 1 %

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DIFFERENTIAL LEUKOCYTE COUNT (DLC)  कैसे  करते  हैं :

Pathology  lab  में  Specimen  का  microscopic  glass  slide  में  smear  बनाने   के   बाद  examine  करने  के  लिए  slide   को  रंजक  घोल  द्वारा  रंगना  होता  है | ताकि  specimen में  उपस्थित cells की  पहचान  हो  सके |  रंजक  द्वारा  रंगने  पर  cells, cells nucleus, cytoplasm, granules  इत्यादि  अलग अलग  color  में  रंग  जाते है | जिससे  पहचान  करने  में  आसानी  होती  है |  smear slide  को आवश्यकतानुसार  अलग अलग  रंजक घोल  में  रंगा  जाता है  blood smear  को   stain  करने  के पश्चात्  इसे   microscope  में  oil immersion objective (100X)  में  परीक्षण  किया  जाता  है |

Requirement:

1.     Stained  Blood Smear Slide.

2.    Immersion Oil.

3.    Microscope.

4.    Cells Tally Counter.

Procedure:

1.  एक  Stained microscopic blood smear slide ले.|

2. Stained microscopic blood smear slide  में  blood smear  पर  एक  drop  Immersion Oil  का  डालें |

3. अब  blood smear slide  को  microscope  के  stage  पर  रख कर  stage  clips  से  lock  कर  दें |

4. Blood smear slide  को  microscope  के  Stage  Aperture(छेद) के पास ले जायें |   

5.     Microscope  के   oil immersion objective (100X)  को  focus  करें   |

       6.    Microscope  के  Coarse focus knob  और  Fine focus knob  की  सहायता  से   Fine  focus  करके  blood smear slide  में  उपस्थित  cells  को  देखे  और  count  करें |

Cells  Counting  कैसे  करें :

1.      Cells  Tally Counter  से

        2.    Table  बनाकर |

Cells  Tally Counter  से –

1.  Microscope  के   oil immersion objective (100X)  को  focus और  Fine focus knob  को   Right hand  से  Fine  focus  करें  और   blood smear slide  में  उपस्थित  cells  को  देखकर  पहचान करे   |

2.  Left  hand  के  सभी  उँगलियों  को  Cells  Tally Counter  के   key  पर  रखे  और  देखे  गये  cells  के name  वाले  key  को  दबाएँ  (press करें )|

3.     इसी   प्रकार  से  100 cells count  करें |

Table  बनाकर cells counting –

1.   ग्यारह ( 11 ) horizontal  और  ग्यारह ( 11 ) vertical line  खींचें  |

2.    इस  तरह  100 खानें  बनेगें |

3.     अब  Microscope  से  cells  को  पहचान  कर  खानें  में  (Neutrophis = N,  Lymphocytes = L, Eosinophils = E, Monocytes = M  और  Basophils = B लिखते  जायें |

4.    इस तरह  सभी खाने  भर  जाने पर  100 cells  हो जायेगें  और  अब  N,L,E,M,B कितने –कितने  हैं  note   कर लें |  Exp. N= 60 (60%), L=30(30%), E=8(08%),  M=2(02%,  B=0(00%).

इस  प्रकार  से  आप  भी  Stained  Blood Smear slide   को  microscope    से  देख  कर  Differential Leukocytes  Count ( DLC ) कर  सकते  है |

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